Исследование фармакокинетики мебеверина в форме капсул с пролонгированным высвобождением
Чт, 15 Июнь 2017
309

Резюме. Было проведено исследование фармакокинетики мебеверина в форме капсул с пролонгированным высвобождением на 24 здоровых добровольцах. Известно, что данное лекарственное вещество полностью метаболизируется на пресистемном этапе. Поэтому измерялись фармакокинетические параметры только его основных метаболитов - мебевериновой кислоты и деметилированной мебевериновой кислоты. Для определения концентрации данных метаболитов в плазме крови разработана биоаналитическая методика с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.

Ключевые слова: мебеверин, мебевериновая кислота, деметилированная мебевериновая кислота, фармакокинетика, ВЭЖХ-МС/МС

Pharmacokinetic study of prolonged release capsules of mebeverine

Khokhlov A.L.1,2, Dzhurko Yu.A.2, Shitov L.N.1,2, Yaichkov I.I.1,2, Shitova A.M.2, Khozova L.A.2, Miroshnikov A.E.1

1 - The Yaroslavl State Medical University, Yaroslavl

2 - Quinta-Analytica Yaroslavl LLC, Yaroslavl

Resume. Pharmacokinetic study of prolonged release capsules of mebeverine was carried out on 24 volunteers. It is known that the drug substance is completely metabolized due to first-pass effect. Therefore, pharmacokinetic parameters of the main metabolites - mebeverine acid and desmethyl mebeverine acid were measured. Bioanalytical method was developed to measurement of concentrations of these metabolites in blood plasma by using HPLC-MS/MS.

Keywords: mebeverine, mebeverine acid, desmethyl mebeverine acid, pharmacokinetic, HPLC-MS/MS

Автор, ответственный за переписку:

Яичков Илья Игоревич - аспирант кафедры клинической фармакологии с курсом ИПДО ФГБОУ ВО «Ярославский государственные медицинский университет» МЗ РФ; 150043, г. Ярославль, ул. Автозаводская, д.29, кв. 97; +7 (910) 977-74-98; e-mail: ilya_1993_08@mail.ru

Введение

Мебеверин является миотропным спазмолитиком, механизм действия которого основан на блокаде быстрых натриевых и медленных кальциевых каналов на мембране миоцита, что замедляет её деполяризацию и препятствует сокращению мышечных волокон. Он обладает высокой селективностью в отношении гладкомышечных клеток желудочно-кишечного тракта, поэтому его используют, в основном, при спазмах различных отделов пищеварительной системы. Данный препарат обеспечивает как надёжный антиспастический эффект, так и препятствует развитию атонии (прокинетическое действие) [1].

Мебеверин, являющийся сложным эфиром, быстро гидролизуется на этапе пресистемной элиминации ферментами-эстеразами до 3,4-диметоксибензойной (вератровой) кислоты и мебеверинового спирта. Основными метаболитами данного препарата являются мебевериновая кислота (МК) и деметилмебевериновая кислота (ДММК) (рис.1) [2].

Период полувыведения ДММК при приёме капсул с пролонгированным высвобождением, по данным [1, 3], составляет 5—6 ч, максимальная концентрация в крови (Cmax) после однократного приёма составляет — 679 нг/мл, после двукратного приёма — 804 нг/мл, время достижения максимальной концентрации (Tmax) около 2,92 ч. Площадь под фармакокинетической кривой «концентрация-время» от нуля до последнего отбора крови (AUC0-t) для ДММК, согласно [3], равна 4 552 нг х ч/мл, константа элиминации равна 0,147 ч-1. Значения фармакокинетических параметров для МК не опубликованы. Поэтому получение новых данных о фармакокинетике мебеверина в форме капсул с модифицированным высвобождением является актуальным.

Известны методики количественного определения метаболитов мебеверина в плазме крови методами ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС/МС [2-6]. Недостатками данных методик является длительная пробоподготовка с использованием твёрдофазной и жидкостно-жидкостной экстракции и низкая чувствительность.

В связи с этим целью данной работы является изучение фармакокинетики лекарственного препарата мебеверина в форме капсул (Дюспаталин) и разработка новой чувствительной и экспрессной биоаналитиче-ской методики для определения концентрации его метаболитов в плазме крови методом ВЭЖХ-МС/МС.

Материалы и методы

Для измерения концентраций метаболитов мебеверина в плазме крови использовалась ВЭЖХ- МС/МС-система, оснащённая трёхквадрупольным масс-спектрометрическим детектором Thermo Scientific TSQ Quantum Ultra. Подготовка проб осуществлялась методом осаждения белков; процедуры пробоподготовки включали внесение в образцы внутренних стандартов — мебевериновой кислоты D5(МК-D-5) и деметилированной мебевериновой кислоты-D5 (ДММК-D5) (рис. 2). Разделение компонентов биологической матрицы проводили на двух хроматографических колонках Phenomenex Luna 5uC8, (150 х 4,6 мм, 5 мкм) и Phenomenex Luna 5uC8, (150 х 4,6 мм, 5 мкм) с использованием подвижной фазы на основе ацетонитрила и формиатного буферного раствора при градиентном режиме элюирования. Масс-спектрометрический детектор работал в режиме регистрации положительных ионов последующим MRM-переходам: для МК m/z - 280—>121, для ДММК m/z - 266,2—>107, для МК-D5 m/z - 285—121, для ДММК-D5 m/z - 271—107. Время анализа составило 6 мин.

Валидация аналитической методики выполнялась в соответствии с требованиями руководств EMEA [7], FDA [8] и Руководства по экспертизе лекарственных средств НЦЭСМП (Т.1) [9]. Полученные результаты валидационных тестов представлены в табл. 1, они отвечают всем установленным критериям приемлемости. Определение концентраций обоих аналитов проводилось в диапазоне от 10 до 2 000 нг/мл. Были использованы следующие калибровочные точки:10, 50, 200, 500, 750, 1 000, 1 500, 2 000 нг/мл. Содержание определяемых веществ в образцах контроля качества составило 10, 30, 400, 800, 1 600, 2 000 нг/мл.

Исследование фармакокинетики

Исследование фармакокинетики препарата Дюспаталин проводилось в соответствии с требованиями ГОСТ Р 52379-2005 «Надлежащая клиническая практика», нормативных документов FDA [10] и EMEA [11], а также в соответствии с этическими принципами, изложенными в Хельсинкской Декларации [12].

В популяцию для оценки фармакокинетических параметров было включено 24 испытуемых в возрасте от 18 до 45 лет, в том числе 13 женщин и 11 мужчин европеоидной расы, отобранных согласно критериям включения и не включения. В скрининге приняло участие 37 кандидатов. Средний возраст добровольцев составил 25,8±7,1 лет, рост - 171,5±9,4 см, масса - 68,1±10,5 кг, ИМТ - 23,3±2,8 кг/м2.

Отбор образцов крови осуществлялся до приёма препарата и через 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 5; 6; 8; 10; 12 и 24 ч после приёма препарата через локтевые катетеры [3, 13]. Плазму немедленно отделяли центрифугированием и замораживают при температуре не выше — 20 °С. В связи с быстрым пресистемным метаболизмом лекарственного вещества определялись концентрации двух основных метаболитов — мебевериновой кислоты и деметилмебевериновой кислоты [1—6].

Для исследования использовался препарат Дюспаталин в форме капсул пролонгированного действия в дозировке 200 мг производства «Эбботт Хелскеа САС» (Франция) (серия 10215, годен до 04.2017).

Статистическая обработка полученных результатов проводилось с помощью пакетов программного обеспечения Rv. 3.2.1, модуль Bear (Lee, Hsin- yaandLee, Yungjin (2014). bear: Data Analysis Tool for Average Bioequivalence and Bioavailability.Rpackage version 2.6.4) и StatSoft STATISTICA v.12. Рассчитывались следующие фармакокинетические параметры:

•максимальное измеренное значение концентрации метаболитов в плазме крови (Cmax);

•время достижения максимальной концентрации (Tmax);

•площадь под фармакокинетической кривой «концентрация-время» от нуля до последнего отбора крови (AUC0-t), при котором концентрация метаболитов равна или выше нижнего LLOQ методики;

•площадь под фармакокинетической кривой, начиная с нулевого значения времени до бесконечности (AUC0-∞);

•отношение значений AUC0-t к AUC0-∞ — относительная скорость всасывания (Cmax/AUC);

•константа скорости терминальной элиминации (Kel);

•период полувыведения метаболитов (Т1/2);

•среднее время удержания метаболитов в крови (MRT).

Полученные результаты представлены в табл. 2 и проиллюстрированы на рис. 4. Среднее значение соотношения AUC0-t/AUC0-∞ для мебевериновой кислоты равнялись 88,51%, для деметилированной мебевериновой кислоты — 86,26%, что указывает на достаточную длительность наблюдения. Средние значения максимальных концентраций МК и ДММК, определяемых в плазме крови добровольцев, составили 62,52+35,01 и 291,81 + 125,92 нг/мл, соответственно, средние значения AUCo-t - 293,94+151,78 и 2191,85+542,94 нг х ч/мл, соответственно, средние значения Tmax — 3,27+1,03 и ,19±1,48 ч, соответственно. Таким образом, время наступления максимальной концентрации для обоих метаболитов было практически одинаковым, при этом максимальная концентрация в плазме, AUC0-t у ДММК значительно выше, чем у МК. Это может свидетельствовать о том, что большая часть МК сразу после окисления мебеверинового спирта подвергается деметилированию.

Рассчитанные фармакокинетические параметры ДММК существенно отличаются от данных ранее опубликованных исследований (табл. 3) [1—3]. Так, полученные средние значения Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ приблизительно в 2 раза ниже, а измеренный период полувыведения на 2 ч дольше, чем по данным литературы. Это может быть связано с высокой межсубъектной вариабельностью и влиянием ситуационных факторов на процесс гидролиза лекарственного вещества на пресистемном этапе.

Выводы

Таким образом, разработана и валидирована новая экспрессная, точная и чувствительная ВЭЖХ-МС/ МС-методика количественного определения основных метаболитов мебеверина в плазме крови человека, отвечающая всем необходимым требованиям, изложенным в руководствах EMEA, FDA и НЦЭСМП. Предел количественного определения для МК и ДММК составил 10 нг/мл. В результате проведённого с использованием данной методики исследования фармакокинетики капсул в дозировке 200 мг были получены новые данные о фармакокинетических параметрах мебевериновой и деметилмебевериновой кислот, которые могут быть использованы для разработки дизайна исследований биоэквивалентности.

Литература

1.Brittain H.G. Analytical Profiles of Drug Substances and Excipients, Vol. 25.California:Academic press, 1998.

2.StockisA., Guelen P.J.M., de Vos D. Identification of Mebeverine Acid as the Main Circulating Metabolite of Mebeverine in Man. J Pharm Biomed Anal. 2002; 29: 335-340.

3.Winsemius A., Meuwsen I.M., Boon C., van der Laan A., Brekle A., de Vries M. A pharmacokinetic comparison of the modified release capsule and a plain tablet formulation of mebeverine. Int J Clin Pract. 2002; 9 (56): 659-662.

4.Elliott S., Burgess V. Investigative implications of the Instability and Metabolism of Mebeverine. J Anal Tox. 2006; 30: 91-97.

5.Bergeron M., Bergeron A., Amsterdam P., Furtado M., Garofolo F. Use of polarity switching for the simultaneous bioanalysis of analytes with three orders of magnitude difference in concentration by HPLC-MS/MS. Bioanal. 2013; 5 (15): 1911-1918.

6.KhatriCA., PhanikumarCh V., JayaveeraK., Reddy K.Y. Development and Validation of Bioanalytical Method for Simultaneous Quantification of Veratric Acid, Mebeverine Acid and Desmethyl Mebeverine Acid in Human Edta Plasma by Using LC-MS/MS. J Pharm Chem. 2012; 4 (6): 11-18.

7.Guideline on validation of bioanalytical methods (draft), European Medicines Agency, Committee for medicinal products for human use; 2010.

8.Guidance for Industry: Bioanalytical method validation. U. S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER), U. S. Government Printing Office, Washington, DC; 2013.

9.Миронов А.Н., ред. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Т. 1. М.: Гриф и К; 2013.

10.Food and Drugs Administration Guidance for Industry: Waiver of In Vivo Bioavailability and Bioequivalence Studies for Immediate Release Solid Oral Dosage Forms Based on Biopharmaceutics Classification SystemRockville, MD: U.S. Department of Health and Human Services, FDA, Center for Drug Evaluation and Research; 2015.

11.Guidance on the investigation of bioequivalence,European Medicines Agency, Committee for medicinal products for human use; 2010.

12.Declaration of Helsinki of the AMM-Ethical Principles for Medical Research in humans, Wrrld Medical Assembly, 64th General Assembly; 2013.

13.Хохлов А.Л., Лилеева Е.Г., Синицина О.А., Спешилова С.А., Демарша С.М., Шитов Л.Н. Проблемы проведения биоаналитической части исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в России. Фармакокинетика Фармакодинамика. 2014; 1: 37-43.

Похожие статьи