Оценка биоэквивалентности двух таблетированных форм лизиноприла на здоровых добровольцах
Пн, 30 Нояб -0001
2458

Резюме

В рамках перекрёстного, однократного, открытого, рандомизированного исследования с периодом отмывки 1 неделя, с двумя последовательностями на 18 добровольцах изучена биоэквивалентность таблеток, покрытых оболочкой, лизиноприла двух производителей (доза 20 мг). Концентрацию лизиноприла в образцах плазмы крови определяли методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием в течение 72 ч. Для исследуемых препаратов рассчитаны следующие фармакокинетические параметры: AUC0-∞, Cmax, tmax, Cmax/AUC. 90% доверительный интервал отношений AUC0-∞ сравниваемых препаратов составил 0,8520 – 1,2102 и для Cmax – 0,9288 – 1,1451. В дополнение к 90% доверительным интервалам, дисперсионный анализ не выявил статистически значимых различий между изучаемыми препаратами. Сделан вывод о биоэквивалентности сравниваемых препаратов лизиноприла.

Ключевые слова: лизиноприл, ВЭЖХ, флуорометрическое детектирование, биоэквивалентность

Введение

Лизиноприл, (S)-1-[N2-(1-карбокси-3-фенил)-L-лизил]-L-пролина дигидрат, представляет собой длительно действующий ингибитор ангиотензин-превращающего фермента, который используется для лечения гипертензии и хронической сердечной недостаточности в суточной дозировке 5-40 мг [4]. Он снижает концентрации ангиотензина и альдостерона в плазме крови за счёт ингибирования ангиотензин-превращающего фермента.

На рынки стран СНГ введены в обращение несколько воспроизведённых препаратов лизиноприла. При этом следует иметь ввиду, что воспроизведённый препарат должен быть эквивалентен оригиналу по фармакокинетическим и фармакодинамическим параметрам, обладая при этом более низкой стоимостью, что делает его доступным для большего числа пациентов с хроническим инвалидизирующим заболеванием. Поэтому целью данного исследования является оценка биоэквивалентности двух препаратов лизиноприла.

Материалы и методы

Методом отбора к исследованию были допущены 8 женщин и 10 мужчин (35,3±6,0 лет; 68,6±6,3кг; 170,5±6,0 см).

В случайном порядке добровольцы принимали вначале 1 таблетку (20 мг) тестируемого препарата (Лизиноприл, таблетки 20 мг, АО «Химфарм», Республика Казахстан; тест-препарат; Т) [1-й период исследования], спустя 7 дней – 1 таблетку (20 мг) референс-препарата (Лизиноприл-Ратиофарм® таблетки 20 мг, производства «Меркле» ГмбХ, ФРГ; препарат сравнения; R) [2-й период исследования]. В обратном порядке добровольцы вначале принимали 1 таблетку препарата Лизиноприл-Ратиофарм® [1-й период исследования], а затем спустя 7 суток – 1 таблетку Лизиноприла [2-й период исследования]. Препараты принимали внутрь, не разжёвывая, запивая 200 мл воды. Взятие образцов крови для определения содержания лизиноприла в плазме крови осуществлялось в дискретные интервалы времени – до принятия препарата (0) и через 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 6,0, 8,0, 12,0, 24,0,48,0 и 72,0 ч после приёма препаратов.

Определение концентраций лизиноприла в плазме крови добровольцев проводили методом ВЭЖХ с флуорометрическим детектированием [5]. В качестве дериватизирующего агента использовали флюороскамин (0,7 мг/мл в ацетоне). Предел количественного определения лизиноприла составил 5,0 нг/мл.

Оценка биоэквивалентности проводилась применительно к параметрам площади под фармакокинетической кривой лизиноприла в плазме крови добровольцев от ноля до бесконечности (AUC0-¥, поскольку вклад экстраполированной части кривой от последней точки определения концентрации лизиноприла до бесконечности в среднем составил 2,2%) и максимальной концентрации лизиноприла в плазме крови (Cmax) (натуральные и логарифмически преобразованные данные) с использованием методов параметрической статистики.

В статье представлены результаты дисперсионного анализа ANOVA для показателей биоэквивалентности lnAUC0-¥ и lnCmax. Условием применения является предположение о нормальном распределении изучаемых показателей.

В качестве рабочей была принята нулевая гипотеза: между средними значениями показателей биоэквивалентности тест-препарата и препарата сравнения отсутствуют статистически значимые различия.

В качестве источников вариации изучались межиндивидуальные различия, обусловленные испытуемыми, которые принимали исследуемые препараты («испытуемые»), лекарственной формой препарата («препарат») и последовательностью приёма препаратов («последовательность»).

Гипотеза биоэквивалентности принималась, когда 90% доверительный интервал для отношения среднего значения (mT/mR) логарифмически преобразованных данных AUC, составлял 0,8T/mR<1,25, для Cmax и Cmax/AUC 0,7T/mR< 1,33. Границы, этих интервалов, рассчитывались при помощи дисперсионного анализа ANOVA. Расчёт 90% доверительных интервалов проводили с использованием программы «Bioeqv», Россия [3].

Расчёт фармакокинетических параметров анализируемых препаратов проведён с использованием модельно-независимого метода. В табл. 1 приведены средние арифметические значения (`X), соответствующие им стандартные отклонения (SD) и стандартные ошибки среднего значения (S`x), коэффициенты вариации (C.V.%), размах – непараметрический параметр статистики (разность между максимальным и минимальным значениями ряда) и среднее геометрическое (геом.).

Рассчитывали парные t-критерии Стьюдента в предположении отсутствия влияния периода получения препарата и нормального распределения изучаемого показателя. По результатам строили графики, показывающие распределение индивидуальных различий между значениями показателя для сравниваемых препаратов. График индивидуальных различий демонстрирует, насколько симметрично они расположены относительно оси абсцисс. График стандартизованных различий (центрированных на среднее значение и нормированных на стандартное отклонение) позволяет выявить резко отличающиеся индивидуальные различия. Учитывая нормальное распределение индивидуальных различий (со средним значением равным 0 и стандартным отклонением равным 1), более 95% от их общего числа должно располагаться в полосе [-2;2].

Результаты и их обсуждение

На рис. 1 представлены усреднённые фармакокинетические профили лизиноприла в плазме крови добровольцев после однократного приёма 20 мг таблеток Лизиноприл и Лизиноприл-Ратиофарм, где анализируемое лекарственное вещество определяется на протяжении 72 ч.

Рис. 1. Усредненные фармакокинетические профили лизиноприла в плазме крови добровольцев после однократного приёма 20 мг таблеток Лизиноприл (тест-препарат) и 20 мг таблеток Лизиноприл-Ратиофарм (референс-препарат) (n=18; ±SD)

 

Сравнительный анализ основных фармакокинетических параметров (табл. 1) лизиноприла, полученных по концентрационным кривым лизиноприла из таблеток Лизиноприл и Лизиноприл-Ратиофарм показал, что изучаемые препараты всасываются из желудочно-кишечного тракта практически с одинаковой скоростью. Так параметр, характеризующий скорость всасывания – Сmax/AUC0-∞ для таблеток Лизиноприла составил 0,0410±0,0080 ч-1, и для таблеток Лизиноприл-Ратиофарм – 0,0401±0,0065 ч-1 (между сравниваемыми параметрами статистически значимые отличия не обнаружены). Время достижения максимальной концентрации (tmax) лизиноприла в плазме крови добровольцев не отличалось для сравниваемых препаратов и составило в среднем – 6,3±0,8 ч. При этом средняя максимальная концентрация лизиноприла, определяемая в плазме крови добровольцев (Cmax), составила для таблеток Лизиноприла – 81,6±13,6 нг/мл и для таблеток Лизиноприл-Ратиофарм – 79,1±13,4 нг/мл.

 

Таблица 1

Фармакокинетические параметры лизиноприла у добровольцев после однократного приёма 20 мг исследуемых препаратов

 

AUC0-

(нг/мл´ч)

Cmax

(нг/мл)

t max

(ч)

Cmax/ AUC

-1)

Т

R

Т

R

Т

R

Т

R

2056,1

2022,1

81,6

79,1

6,3

6,3

0,0410

0,0401

SD

500,0

482,0

13,6

13,4

0,8

0,8

0,0080

0,0065

S

117,9

113,7

3,2

3,2

0,2

0,2

0,0019

0,0015

C.V.%

24,32

23,84

16,70

17,00

12,11

12,11

19,55

16,16

Размах

1839,8

1685,4

58,0

49,8

2,0

2,0

0,0294

0,0280

геом.

1997,6

1967,3

80,5

78,0

6,3

6,3

0,0403

0,0397

 

Анализ основного параметра, характеризующего степень и скорость биодоступности действующего вещества из лекарственной формы – AUC0-∞ указывает на умеренную вариабельность данного параметра (не выше 25%). Среднее значение AUC0-∞ для препарата Лизиноприл составило 2056,1±500,0 и для Лизиноприл-Ратиофарм – 2022,1±482,0 нг/мл´ч. При этом не выявлено достоверно значимых различий для сравниваемых величин.

Степень относительной биологической доступности лизиноприла из таблеток тест-препарата по отношению к референс-препарату, определяемая отношением соответствующих значений AUC0-∞, составила в среднем 1,103±0,474% (усреднённые данные на основании точечных индивидуальных оценок) (табл. 2).

Таблица 2 Точечная оценка индивидуальных отношений параметров, характеризующих относительную биодоступность (f) лизиноприла из таблеток Лизиноприл и Лизиноприл-Ратиофарм (T-тест/R-референс)

№/№

AUC-ratio

Cmax-ratio

Cmax/AUC-ratio

1

0,58720

0,87807

1,49490

2

1,08854

0,94142

0,86321

3

1,27689

0,89308

0,69932

4

1,29391

0,99128

0,76522

5

0,89602

0,80845

0,90226

6

2,36468

1,59619

0,67512

7

0,82369

0,80865

0,98006

8

0,44121

0,48651

1,10165

9

0,83033

1,08582

1,30769

10

1,71076

1,30587

0,76310

11

1,3777

1,69432

1,22965

12

1,63784

1,26408

0,77172

13

0,66192

1,02964

1,55738

14

0,99669

1,13820

1,14332

15

0,87144

1,03125

1,18256

16

1,38273

1,27208

0,92148

17

0,7019

0,91842

1,30769

18

0,90535

1,09302

1,20604

1,10271

1,06869

1,04846

SD

0,47443

0,28701

0,27184

S

0,111895

0,06769

0,064112

C.V.%

43,02

26,86

25,93

Доверительный интервал для логарифмически преобразованных значений AUC0-∞ составил 0,8520 – 1,2102 (или 85,20 – 121,02%). Степень биодоступности, определяемая отношением соответствующих значений Cmax, составила 1,0687±0,2870, а доверительный интервал для логарифмически преобразованных значений Cmax – 0,9288 – 1,1451 (или 92,88 – 114,51%). Полученные данные представлены в табл. 3.

Таблица 3

90% доверительные интервалы отношения среднего значения (mT/mR) AUC0-∞ и Cmax (логарифмически преобразованные данные), полученные на основе дисперсионного анализа (ANOVA)

Параметр

Нижнее

значение

Верхнее

значение

AUC0-∞

0,85200

1,21015

Cmax

0.92881

1.14508

ln AUC0-

Источник вариации

SS

DF

MS

F

Препарат

0.018

1

0.018

1.84435

Последовательность

0.024

1

0.024

2.44571

Добровольцы

0.769

17

0.045

4.63858

Остаточная вариация

0.156

16

0.010

 

Общая вариация

0.967

35

 

 

ln Cmax

Источник вариации

SS

DF

MS

F

Препарат

0.003

1

0.003

0.26483

Последовательность

0.000

1

0.000

0.00012

Добровольцы

0.359

17

0.021

1.61603

Остаточная вариация

0.209

16

0.013

 

Общая вариация

0.572

35

 

 

Примечание:

SS – сумма квадратов отклонений;

MS – средний квадрат;

DF – число степеней свободы;

F – рассчитанное значение F-критерия Фишера (при уровне значимости α=5%).

                       

Рис. 2. График стандартизованных различий (центрированных на среднее значение и нормированных на стандартное отклонение) для значений ln AUC0-∞ лизиноприла

Рис. 3. График индивидуальных стандартизованных различий (центрированных на среднее значение и нормированных на стандартное отклонение) для значений Cmax лизиноприла

 

Полученные интервальные значения лежат в пределах, установленных «Оценкой биоэквивалентности лекарственных средств (Методические рекомендации)» и «Проведением надлежащих исследований биоэквивалентности лекарственных средств в Республике Казахстан» [1, 2], что говорит о биоэквивалентности исследуемых препаратов.

Дисперсионный анализ показал, что на конечные результаты оказал влияние такой фактор, как «испытуемые»: на AUC0-∞ – доброволец № 6, на Cmax – доброволец №8 (см. табл. 3, рис. 2, 3).

В литературе описаны случаи оценки биоэквивалентности различных воспроизведенных препаратов лизиноприла. Так, Neng Zhou и соавт. разработали ВЭЖХ-МС методику определения лизиноприла в плазме крови человека и апробировали ее при изучении биоэквивалентности 2 препаратов лизиноприла (доза 20 мг) на 18 добровольцах [6]. Авторами сделан вывод о биоэквивалентности исследуемых препаратов. Представленные в этом исследовании фармакокинетические параметры значительно отличались от полученных нами (за исключением tmax). Имеющиеся различия можно объяснить разными подходами в пробоподготовке и аналитической методикой. Аналогичные результаты получены Shin M.C. и соавт. и Tamimi J.J. и соавт., доказавших биоэквивалентность препаратов лизиноприла на 26 и 28 добровольцах, соответственно, с использованием метода ВЭЖХ-МС/МС [7, 8].

Литература

1. Оценка биоэквивалентности лекарственных средств (Методические рекомендации), Москва, 2008, с.32.

2. Проведение надлежащих исследований биоэквивалентности лекарственных средств в Республике Казахстан, Астана, 2007, с. 44.

3. Сергиенко В.И., Джеллифф Р., Бондарева И.Б. Прикладная фармакокинетика: основные положения и клиническое применение. Москва, Издательство РАМН, 2003; 208.

4. Регистр лекарственных средств России РЛС. Энциклопедия лекарств. Москва, РЛС-Медиа, 2013; 1296.

5. Sagirli O., Ersoy L. An HPLC method for the determination of lisinopril in human plasma and urine with fluorescence detection. // J. Chromatogr. B. 2004, Vol. 809, Р. 159-165.

6. Neng Zhou1, Yi-zeng Liang1, Ben-mei Chen et al. Development and Validation of LC–MS Method for the Determination of Lisinopril in Human Plasma and its Application in a Bioequivalence Study. // Journal of Chromatogr. Sci. 2008, Vol. 46, Р. 848-853.

7. Shin M.C., Kim J.K., Kim C.K. Bioequivalence evaluation of two brands of lisinopril tablets by in vitro comparative dissolution test and in vivo bioequivalence test. // Arzneimittelforschung. 2008, Vol. 58(1), P. 11-17.

8. Tamimi J.J., Salem I.I., Alam S.M., Zaman Q., Dham R. Bioequivalence evaluation of two brands of lisinopril tablets (Lisotec and Zestril) in healthy human volunteers. // Biopharm. Drug Dispos. 2005, Vol. 26(8), P. 335-339.

 

Похожие статьи