Тропоксин в эффективной дозе у крыс не оказывает влияния на активность изоформ CYP2С9 и CYP1А2 цитохрома P450
Вт, 27 Фев 2018
328

Резюме. Представлены результаты изучения влияния тропоксина на активность изоформ цитохрома CYP2С9 и CYP1А2 по маркерным препаратам лозартану и кофеину в экспериментах на крысах. Показано, что тропоксин в эффективной дозе (30 мг/кг) после 4-дневного введения (3 раза в день) не вызывает изменения активности исследуемых изоформ. Изучение влияния продолжительности введения тропоксина на изменение активности изофермента CYP2C9 показало, что введение лекарственного средства в течение 3 или 4 дней не оказывает ни ингибирующего, ни индуцирующего эффекта на изоформу CYP2C9.

Ключевые слова: тропоксин, CYP2С9, CYP1A2, лозартан, кофеин, метаболическое отношение, межлекарственное взаимодействие

Tropoxine in the effective dose does not affect on activity of CYP2С9 and CYP1А2 isoforms of cytochrome P450 in rats

Zherdev V.P., Kolyvanov G.B., Litvin A.A., Grybakina O.G., Bochkov P.O., Shevchenko R.V.

FSBI «Zakusov Institute of Pharmacology», Moscow

Resume. Effects of tropoxine on activity of isoforms CYP2С9 and CYP1А2 of cytochrome P450 using marker drugs losartane and caffeine were studied. Tropoxine in the effective dose (30 mg/kg) after 4-days intraperitoneal administration (3 times per day) in rats did not produce changes of CYP2C9 and CYP1A2 isoforms actitvity. Study of duration of tropoxine administration on the CYP2C9 acivity changing was shown that 3 and 4 days administration of the drug did not affect neither inhibiting nor inducing effect of CYP2C9 isoform.

Keywords: tropoxine, CYP2С9, CYP1A2, losartane, caffeine, metabolic ratio, drug-drug interaction

Автор, ответственный за переписку: Литвин Александр Алексеевич — д.б.н. ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова»; 125315, г. Москва, ул. Балтийская, 8; e-mail: litbiopharm@yandex.ru

Введение

Одной из наиболее важных метаболизирующих ферментных систем в организме человека является система цитохрома Р450 (CYP), которая отвечает за окислительный метаболизм многочисленных эндогенных веществ и ксенобиотиков [8]. У людей около 90 % лекарств и ксенобиотиков в первую очередь метаболизируются изоферментами семейств CYP1, CYP2, CYP3 и CYP4 [9]. Многие лекарственные препараты могут влиять на активность изоформ цитохрома P450, являясь либо его ингибиторами, либо индукторами, что может лежать в основе межлекарственного взаимодействия, и требует учёта при сочетанной фармакотерапии [5].

В ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» разработано лекарственное средство (ЛС) из группы производных оксима тропинона, обладающее про- тивомигреневой антисеротониновой активностью – тропоксин [1, 3, 4]. Влияние новых ЛС на изоформы цитохрома Р450 необходимо оценивать уже на доклиническом этапе, поэтому целью настоящего исследования явилась оценка влияния тропоксина на изменение активности изофермента CYP2C9 и CYP1A2 в дозе 30 мг/кг (в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч). Дополнительно изучено влияние эффективной дозы тропоксина на изменение активности изофермента CYP2C9 при разной длительности введения препарата (3- и 4-дневное введение).

Материалы и методы

Изучение влияния тропоксина на изменение активности изоформы CYP2C9 после его введения в эффективной дозе

В настоящем исследовании оценивали влияние тропоксина в эффективной дозе 30 мг/кг при введении препарата в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч. Выбор дозы основывался на результатах ранее проведённых исследований антимигренозной активности и экспериментальных данных фармакокинетики тропоксина у крыс [2].

Индуцирующий или ингибирующий эффект тропоксина оценивали по величинам метаболических отношений (МО) препарата-маркера. Под «МО» понимали отношение концентрации метаболита лозартана (Е-3174) и кофеина (теобромина и параксантина) к концентрации исходного соединения в суточной моче.

На данном этапе исследования определяли МО (Е-3174/лозартан) после введения лозартана без тропоксина (контроль; I) в сравнении с введением лозартана на фоне 4-дневного введения тропоксина в дозе 30 мг/кг – II.

Крысам вводили сначала перорально лозартан (контроль), затем по истечении 4 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч (субхроническое введение). Лозартан животным вводили через 30 мин после последнего введения тропоксина.

Препарат-маркер лозартан вводили в дозе 30 мг/кг. Крыс помещали в индивидуальные клетки со свободным доступом к воде. У каждой крысы собирали суточную мочу. Анализ проб мочи животных проводили с использованием ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием. Методики экстракции и количественного определения исследуемых веществ описаны Прониной О.Г. и соавт. [7].

Изучение влияния длительности введения крысам тропоксина в дозе 30 мг/кг на изменение активности изоформы CYP2C9

Исследования проводили на 2 группах крыс. В каждую группу входило по 8 животных. Субхроническое 3-дневное введение тропоксина – группа I и субхроническое 4-дневное введение тропоксина – группа II. Крысам I группы сначала вводили перорально лозартан (контроль), затем по истечении 3 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 3 дней, трёхкратно через каждые 3 ч. Крысам II группы сначала вводили лозартан (контроль), затем по истечении 3 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч. Лозартан в дозе 30 мг/кг животным обеих групп вводили через 30 мин после последнего введения тропоксина.

Изучение влияния тропоксина на изменение активности изофермента цитохрома P450 CYP1А2 по данным экскреции с мочой

На данном этапе исследования определяли МО (теобромин/кофеин и параксантин/кофеин) после введения кофеина без тропоксина (контроль; I) в сравнении с введением кофеина на фоне 4-дневного введения тропоксина в дозе 30 мг/кг – II.

Крысам вводили сначала перорально кофеин (контроль), затем по истечении 4 сут этим же животным вводили в/б тропоксин в течение 4 дней, трёхкратно через каждые 3 ч (субхроническое введение). Кофеин животным вводили через 30 мин после последнего введения тропоксина.

Препарат-маркер кофеин вводили животным в дозе 50 мг/кг. Крыс помещали в индивидуальные клетки со свободным доступом к воде. У каждой крысы собирали суточную мочу. Анализ проб мочи животных проводили с использованием ВЭЖХ с УФ-детектированием. Методики экстракции и количественного определения исследуемых веществ подробно описаны Новицкой и соавт. [6].

Достоверность различий между величинами МО после введения препаратов-маркеров (лозартана и кофеина) без тропоксина (контроль) и на фоне субхронического введения тропоксина оценивали с помощью парного t-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждения

На рис. 1 представлены отношения концентраций метаболита к препарату-маркеру в суточной моче крыс, т. е. МО после введения крысам лозартана без тропоксина (контроль; I) и введения лозартана на фоне субхронического введения тропоксина в дозе 30 мг/кг (II). Так, после введения лозартана без тро- поксина МО составило 1,70 ± 0,67, а после введения лозартана на фоне субхронического введения тропоксина – 2,12 ± 0,81.

При сравнении величин МО (Е-3174/лозартан) после введения лозартана без тропоксина (контрольная группа) и после введения лозартана на фоне 4-дневного введения тропоксина статистически значимые различия не выявлены (p < 0,05).

На рис. 2 представлены значения МО, полученные в контрольных группах в сравнении с аналогичными параметрами, полученными после введения лозартана на фоне 3- и 4-дневного введения тропоксина. При сравнении величин МО не выявлены статистически значимые различия в контрольных группах в сравнении с введением лозартана на фоне 3- и 4-дневного введения тропоксина (р < 0,05). МО в контрольной группе составило 2,06 ± 1,01, а после субхронического 3-дневного введения тропоксина – 2,04 ± 1,09. Результаты 4-дневного эксперимента показали, что МО в контроле составило 1,70 ± 0,67, а после субхронического 4-дневного введения тропоксина – 2, 12 ± 0,81.

 

При сравнении МО, рассчитанных после 3- и 4-дневного введения тропоксина, статистически значимые различия не были выявлены (р < 0,05). МО после субхронического 3-дневного введения тропоксина составило 2,04 ± 1,09; после 4-дневного введения – 2,12 ± 0,81. Таким образом, продолжительность введения тропоксина (3 или 4 дня) в дозе 30 мг/кг не оказывает ни ингибирующего, ни индуцирующего эффекта на изофермент CYP2C9. Также было установлено, что тропоксин в эффективной дозе не оказывал индуцирующего/ингибирующего эффекта на изофермент CYP1А2 (р < 0,05).

На рис. 3 представлены величины МО метаболита кофеина – теобромина к неизменённому веществу после введения кофеина без тропоксина и на фоне 4-дневного в/б введения тропоксина в дозе 30 мг/кг. Среднее значение МО после 4-дневного введения крысам тропоксина в эффективной дозе практически не отличалось от аналогичного параметра в контрольной группе животных. Так, МО в группе I составило 1,68 ± 1,00 и в группе II – 1,49 ± 0,91.

На рис. 4 представлены величины МО метаболита кофеина – параксантина к неизменённому веществу после введения кофеина без тропоксина (I) и на фоне 4-дневного в/б введения тропоксина в дозе 30 мг/кг (II).

Статистический анализ не выявил достоверно значимых различий между величинами МО параксантина в суточной моче животных после введения кофеина без тропоксина (I) и на фоне субхронического введения тропоксина (II). Так, для крыс из группы I этот параметр равнялся 1,70 ± 0,96 и для животных группы II – 1,88 ± 0,90, соответственно. То есть, введение кофеина на фоне 4-дневного в/б введения тропоксина в дозе 30 мг/кг не вызвало изменения активности изофермента CYP1A2.

Заключение

На крысах изучено влияние тропоксина на изменение активности изофермента цитохрома Р450 CYP2C9 (маркерный субстрат – лозартан) и CYP1A2 (маркерный субстрат – кофеин). Изучение влияния дозы 30 мг/кг на изменение активности изоферментов CYP2C9 и CYP1A2 показало, что тропоксин в эффективной дозе после 4-дневного введения (3 раза в день) не вызывает изменения активности данных изоформ. Изучение влияния продолжительности введения тропоксина в дозе 30 мг/кг на изменение активности изофермента CYP2C9 показало, что введение тропоксина в течение 3 или 4 дней не оказывает ни ингибирующего, ни индуцирующего эффекта на изофермент CYP2C9. 

Литература

1. Ганьшина Т.С., Горбунов А.А., Гнездилова А.В. и др. Тропоксин — новое средство для лечения мигрени. Хим.-фарм. журн. 2016; 50: 1: 19–23.

2. Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Литвин А.А. и др. Оценка взаимосвязи между фармакокинетикой и фармакодинамикой тропоксина у крыс Фармакокинетика и фармакодинамика. 2016; 3: 21–25.

3. Косточка Л.М., Мирзоян Р.C., Ганьшина Т.С., Середенин С.Б. Синтез и антисеротониновая активность новых производных тропана. Хим.-фарм. журн. 2010; 44: 9: 6–9.

4. Мирзоян Р.C., Середенин С.Б., Ганьшина Т.С. и др. Эксперим. и клин. фармакол. 1998; 61: 2: 28–31.

5. Новицкая Я.Г. Оценка фармакокинетического взаимодействия афобазола с препаратом-субстратом изофермента цитохрома Р450 CYP1А2. Автореф. канд. биол. наук, М.: 2014; 24.

6. Новицкая Я.Г., Литвин А.А., Жердев В.П. Количественный анализ кофеина и его метаболитов в плазме крови крыс с применением ВЭЖХ, как метод определения метаболических отношений. Вест. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2013; 54: 1: 56–60.

7. Пронина О.Г., Колыванов Г.Б., Виглинская А.О., Жердев В.П. Количественное определение лозартана и его метаболита в моче крыс. Вест. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2012; 53: 2: 194–197.

8. Frye R.F. Probing the world of cytochrome P450 enzymes. Mol Interv. 2004; 4: 3: 157–162. 9. Wijnen P.A., Buijsch R.A., Drent M. et al. Review article: the prevalence and clinical relevance of cytochrome P450 polymorphisms. Aliment Pharmacol Ther. 2007; 26: Suppl. 2: 211–219.

Похожие статьи